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免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。免疫共沉淀具有經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)的優(yōu)點(diǎn)。

免疫共沉淀（CHIRP）實(shí)驗(yàn)意義

IncRNA可與蛋白質(zhì)、DNA和RNA相互作用，實(shí)現(xiàn)多樣化功能，CHIRP可以探討IncRNA與其互作的DNA.蛋白質(zhì)的功能與作用機(jī)制，是相關(guān)科學(xué)研究工作的有力工具。IncRNA的研究在表觀遺傳調(diào)控等生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用，CHIRP是研究

IncRNA的重要技術(shù)手段，可在全基因組范圍內(nèi)鑒定RNA與染色質(zhì)的互作，并對(duì)其進(jìn)行定性、定量及定位的分析。

免疫共沉淀（CHIRP）實(shí)驗(yàn)原理

CHIRP (Chromatin Isolation by RNA Purification)是通過(guò)結(jié)合生物素的核酸探針，將目標(biāo)RNA拉下來(lái),與之共同作用的DNA染色體片段(DNA與蛋白質(zhì)復(fù)合體)就會(huì)被吸附下來(lái)，后可以通過(guò)qRT-PCR. WB.測(cè)序分析和質(zhì)譜分析等檢測(cè)RNA. DNA和蛋白質(zhì)。

CHIRP的實(shí)驗(yàn)流程

①探針設(shè)計(jì):設(shè)計(jì)反義穿核苷酸探針:

②細(xì)胞培養(yǎng);

③破碎細(xì)胞:

④生物素標(biāo)記的DNA探針與RNA雜交;

⑤CHIRP;

⑥RNA、DNA及核酸結(jié)合蛋白提取; .

⑦分析檢測(cè)。,

結(jié)果展示

實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1.實(shí)驗(yàn)周期: 1-3個(gè)月

2.交付標(biāo)準(zhǔn): CHIRP鑒定結(jié)果報(bào)告、分析報(bào)告、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(試劑、 耗材、實(shí)驗(yàn)步驟)、原始數(shù)據(jù)等

實(shí)驗(yàn)需與客戶確認(rèn)的信息

1.目的基因與蛋白信息。

2.樣本類型與種屬

3.是否需要生信分析

注意的問(wèn)題：

（1）細(xì)胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細(xì)胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或Triton X-100)。每種細(xì)胞的裂解條件是不一樣的，通過(guò)經(jīng)驗(yàn)確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS)，細(xì)胞裂解液中要加各種酶抑制劑，如商品化的cocktailer。

（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。

（3）使用對(duì)照抗體：

單克隆抗體：正常小鼠的IgG或另一類單抗

兔多克隆抗體：正常兔IgG

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：